Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次出有现肾脏自身抗锥体到出有现1型号冠心病临床数据比对呕吐的重大突破率在儿童一时期就有很好的所述，多个肾脏自身抗锥体中所性的儿童中所有70%在血清转换后10月内患上冠心病，而随访15年的儿童这一%提高到84%。相比之下，占临床数据比对1型号冠心病一半以上的型号1型号冠心病的发病机制还很难得到充分的数据比对。

更为多的人开始用到有系统子系统来并不一定1型号冠心病的重大突破：形态在出有现多种肾脏自身抗锥体时进到第1阶段，出有现血糖精神状态时进到第2阶段，出有现呕吐时进到第3阶段。一些多发肾脏自身抗锥体中所性的形态，在1期和2期，重大突破较慢，并发展为发病的1型号冠心病。我们之前所述了一一组在首次测定到多种肾脏自身抗锥体样品后至多于10年无冠心病的极快重大突破者，这一组病征人口数多于，但外观上并不明确。随后，我们发现肾脏自身抗原依赖性CD8+T巨噬细胞反应当在重大突破较慢的病征中所原则上不存有，但在近期发病和长期以来存有的冠心病病征中所很很难测定到。这有可能表明，与重大突破病征相比，这些病征诱发反应当的闭环增强。

一时期数据比对表明，尽管闭环性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但冠心病病征存有一些功能缺陷，其中所包括对IL-2的反应当能力也减小。此外，冠心病病征中所的波动CD4+T巨噬细胞有可能对闭环愈来愈具抵抗性，乏善可陈为波动T巨噬细胞的诱导减弱，自然产生的Treg和锥体外产生的诱导Treg，以及抗原境遇的CD4+T巨噬细胞中所IL-2反应当减弱。本数据比对的目的是所述了CD4+闭环性T巨噬细胞(Treg)在这群人极较慢重大突破者中所的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

比对方法：BOX数据比对是一项以人群为基础的横向数据比对，在21岁以下确诊的病征亲属中所核对1型号冠心病的危险因素。我们之前所述了长期以来较慢重大突破者的外观上，他们始终保持多重肾脏自身抗锥体中所性至多于10年，但很难出有现冠心病的临床数据比对呕吐，慢性或非透过性诱发。随后，10名继续始终保持无冠心病并希望提供大量尿液样品的较慢重大突破者纳入T和B巨噬细胞功能比对。在目前的数据比对中所，8名慢重大突破者(SP一组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身抗锥体中所性。所有的行动者都位处1型号冠心病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗锥体对某些抗原的中所性反应当，然而，一名病征已经位处2期至多于6年，但很难出有现临床数据比对呕吐，一名病征被检验为冠心病，该受试者72岁，在采集科学研究样品时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据比对中所对该ADP透过了之外评估。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，有别于多模板流式巨噬细胞拳法和T巨噬细胞诱导试验评估ADP中所Treg的Hz、遗传基因号和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类比对、也就是说和回归)透过无指派聚类比对，评估Treg遗传基因号。

结果：与心理健康ADP相比，来自慢重大突破锥体的潜意识CD4+T巨噬细胞的指派聚类推测，激活的潜意识CD4+ TregHz提高，与组胺诱导的TNFR相关细胞(GITR)声称提高有关。一名HbA1c下降时的病征与重大突破较慢者和匹配的对照一组相比，Treg谱有所各不相同。功能比对表明，与心理健康ADP相比，来自较慢重大突破锥体的Treg酪氨酸的CD4+波动T巨噬细胞诱导引人注意损毁。乏善可陈为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134声称的诱导提高。

三幅1 深入的遗传基因号比对推测，CD4+Treg病毒性号在慢重大突破描述符中所提高。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物声称比对出有10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个各不相同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个端口均是由一个集群(100个集群)，愈来愈大的元集群(10个元集群)在端口一组周围制做。每个端口中所的点心三幅声称单个标明的声称等级。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整锥体标明声称。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)作用于三幅，以及FlowSOM标识的每个元簇的基岩。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster装入中所央线三幅(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。黄色圆圈均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的相吻合号证实，TregHz的提高是重大突破较慢的标志。这两项门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP行动者和匹配的HD行动者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的均是由性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR声称透过分离，精心设计FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(杂色)一组以及ADPSP 606(黄色)中所CD25+ cd127的Hz综合三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装入中所央线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3声称强度着色，箭头突出有的簇被标识为SP和HD描述符错综复杂的各不相同。(j)装入中所央线三幅推测了在SP(杂色)和HD(灰点)一组中所，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(%)。(k)直方三幅推测每个簇的遗传基因号(黑色)和Treg标明相对来说声称与时代背景声称(紫色);上列，CPUTreg_3;下面恰巧，CPUTreg_4。时代背景与所有其他簇中所标明的声称有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩验

三幅3 与心理健康献血者相比，重大突破较慢者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个声称标明的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的声称热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR声称串联，推测直方三幅(c)和综合三幅(d)。Wilcoxon配对表示法秩和验，p< 0.07(黄色)所有ADP包括，p< 0.05(紫色)ADPSP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR声称，从这两项门控，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(黄色)串联，推测直方三幅(e)和综合三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩验

三幅4 来自较慢重大突破的CD4+ treg巨噬细胞控制波动CD4+T巨噬细胞的能力也减小。SP一组用紫色的中所央线和圆圈声称，HD一组用黑色的中所央线和圆圈声称，黄色的中所央线/圆圈声称ADPsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标明为CFSE, Treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培养出有来3翌日透过流式巨噬细胞拳法测定。(a-d)与CD4+需要的话者相对来说应当的treg培养出有来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养出有来。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱导平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导平均值。用到中所性对照(激活的号召巨噬细胞内含treg)计算诱导平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 波动CD4+T巨噬细胞对较慢重大突破的T巨噬细胞再造的诱导愈来愈极端。SP一组用紫色的中所央线和圆圈声称，HD一组用黑色的中所央线和圆圈声称，黄色的中所央线/圆圈声称ADPsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标明，treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造巨噬细胞，培养出有来3翌日透过流式巨噬细胞拳法(CD25反染)和巨噬STAT比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者协力培养出有来。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱导百分比(b)。(c,d) CD25诱导百分比(c)和CD134诱导百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在研究生院出有来中所的声称。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出有的结论是，来自较慢重大突破子的再造潜意识CD4+Treg在GITR声称中所得到了扩展和丰富，强调了进一步数据比对Treg在1型号冠心病风险形态中所的值得注意的必要性。

原文出有处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28